用于快速制備供免yi分析和電泳分離法使用的組織樣本

參考：R. H. ffrench-Constant/A. L. Devonshire, Biochemical Genetics, Vol. 25, Nos. 7/8, 1987.

MULTIPLE HOMOGENIZER多重均質(zhì)器（初設(shè)計用于昆蟲樣本）可以同時制備96個組織樣本，將均質(zhì)化的時間減少了10倍。這樣一個人可可以在較短時間內(nèi)制備3000個用于免yi分析的樣本。

較早的方法耗時耗力，其使用帶有緊密排列玻璃棒的標(biāo)準(zhǔn)微離心管。當(dāng)量化形成蚜蟲對殺蟲劑抵抗力的酶的活動時，這些方法限制了樣本的制備規(guī)模。

圖中展示了部件和組裝方法。將緩沖劑和樣本裝入微型培養(yǎng)皿的井內(nèi)，然后插入復(fù)式杵并按圓周手動旋轉(zhuǎn)。

經(jīng)過上述過程并小心拔出杵后，丟失的量只有5 μl，而這與均質(zhì)量無關(guān)。因此，當(dāng)分別用10 μl和50 μul進行均質(zhì)化后，可靠恢復(fù)的樣本分別為50％和90％。

分析過程所需的其他設(shè)備包括：專門的電泳凝膠體梳（與微型培養(yǎng)皿的坑相對應(yīng)）、8個位置的復(fù)吸液管、電泳柜和供電裝置。

用于快速制備供免yi分析和電泳分離法使用的組織樣本的多重均質(zhì)器

Alan Devonshire

對諸如昆蟲等小生物體進行的群體遺傳學(xué)研究需依靠電泳或免yi分析技術(shù)，其要求對眾多個體進行分析方可保證結(jié)果的代表性。用于電泳分析的昆蟲樣本通過各種均質(zhì)器進行均質(zhì)化，比如帶有緊密排列的玻璃棒的聚丙烯微離心管。但是對單個昆蟲均質(zhì)化后，利用微量注射器加載凝膠體的工作是整個分析過程中至耗時耗力的部分。當(dāng)免yi分析發(fā)展到要量化形成蚜蟲對殺蟲劑抵抗力的酶的活動時，這種樣本制備方法的局限性就變得更加明顯了。

因此我們設(shè)計了可裝入標(biāo)準(zhǔn)免yi培養(yǎng)皿的多重均質(zhì)器，其可以同時均質(zhì)96個單獨樣本以用于免yi分析和電泳分離（ffrench-Constant & Devonshire, Biochemical Genetics, 25, 493－499（1987））。

該均質(zhì)器由10mm厚的塑料玻璃襯板制成，大小與免yi培養(yǎng)皿類似。在均質(zhì)器內(nèi)有96個塑料玻璃棒按9mm的間距排列，與免yi培養(yǎng)皿內(nèi)的96個井準(zhǔn)確對應(yīng)。棒尖是水平的，與井的水平底部正好一致。

樣本被裝入免yi培養(yǎng)皿井內(nèi)的緩沖劑中，插入均質(zhì)器并手動旋轉(zhuǎn)后將其均質(zhì)化。4mm直徑的棒較為理想，因為這樣即可以有效均質(zhì)化又可以在裝配后在井內(nèi)留下足夠的量（200 μl）。

要想確定均質(zhì)化過程中“丟失”的數(shù)量，可將不同量（10－200μl）的PBS/Tween以及蔗糖和溴甲酚紫放入免yi培養(yǎng)皿的8個井中，在經(jīng)過插入、旋轉(zhuǎn)、和拔出均質(zhì)器的杵后，利用復(fù)吸液管確定8個井中可以取回的樣本量。假設(shè)均質(zhì)器是小心拔出的，那么不管經(jīng)過均質(zhì)的樣本量如何，丟失的量均為 5μl。這樣當(dāng)別對10μl和50μl進行均質(zhì)時，可靠恢復(fù)的樣本分別占50％和90％，涵蓋了對小生物體使用電泳分離法時的典型數(shù)量范圍。

如果要使用8通道復(fù)吸液管將樣本直接從免yi培養(yǎng)皿裝入盛有電泳分離凝膠體的井內(nèi)，則需要使用間隔為4.5或9mm的帶井梳。針對這一目的制作的間隔 4.5mm的梳（可從Burkard Scientific購得）可以通過僅使用8通道吸液管的7個尖分兩次來填充不同的井，從而將免yi培養(yǎng)皿的兩行14個樣本裝載到Pharmacia GE-2/4設(shè)備（厚3mm，寬72mm）的每個凝膠體上。這樣在一個電泳箱內(nèi)就可以一次分析56個樣本。盡管吸液管尖過大，不適合Hoffer設(shè)備的 1.5mm凝膠體井，但也成功地使用該復(fù)吸液管將樣本裝入這種設(shè)備中（15井的梳，編號：SE 511－15，間隔9.1mm）。

從粉虱（50μg）到家蠅（20mg）的昆蟲都可以被成功均質(zhì)化，但僅對蚜蟲（約400μg）進行過功效定量評估，用于通過免yi分析研究形成蚜蟲對殺蟲劑抵抗力的酶。使用多重均質(zhì)器制備的蚜蟲樣本與與通過微型離心管制備樣本的相比，其得到的酶活動更明顯（P<0.001），差異也更?。≒<0.001）。

除了更有效的均質(zhì)化外，樣本制備時間也只有采用微離心管進行單獨均質(zhì)化所需時間的1／10。系統(tǒng)其他節(jié)省時間的方面包括：免yi培養(yǎng)皿的井淺并且?guī)Ь幪?，故記錄樣本裝載數(shù)據(jù)更容易；樣本存儲于堆在冷凍機內(nèi)的培養(yǎng)皿內(nèi)；以及使用復(fù)吸液管進行液體處理。如有可用于微型培養(yǎng)皿的離心機，則在分析前就可以去掉組織殘片。

隨著免yi分析在調(diào)查和診斷研究中作用的提升，該快速樣本制備技術(shù)對于與培養(yǎng)皿井內(nèi)的可用量（10－200μl）一致的組織將會有很多生物和醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用。若選用適當(dāng)?shù)氖?，則該技術(shù)也將非常適用于電泳分離研究。假設(shè)在梳井間隔方面沒有其他限制，那么生產(chǎn)商應(yīng)考慮采用標(biāo)準(zhǔn)的4.5或9mm間隔，這樣復(fù)吸液管就可以在樣本制備和裝載中得到更廣泛的應(yīng)用。

訂購須知：

產(chǎn)品代碼	描述
BS00253	多重均質(zhì)器
BS01071	凝膠體梳
BS01072	復(fù)式吸液管
BS01073	電泳柜
BS01074	電源裝置

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